Hintergrundtechnologie
Cagrilintid ist ein neuartiges, langwirksames acyliertes Amylin-Analogon. Als nicht-selektiver Agonist des Amylin-Rezeptors (AMYR) und des Calcitonin-G-Protein-gekoppelten Rezeptors (CTR) ist es ein zyklisches Polypeptid, das aus 38 Aminosäuren besteht. Seine Sequenz enthält 38 Aminosäuren und ein Paar Disulfidbindungen. Cagrilintid kann das Körpergewicht und die Nahrungsaufnahme deutlich reduzieren und hat Potenzial für die Adipositasforschung. Amylin ist ein weiteres Hormon, das außerhalb des GLP-1-Signalwegs mit Hunger und Sättigung zusammenhängt.
Cagrilintid kann die Energieaufnahme reduzieren, die Auswahl und Vorlieben von Nahrungsmitteln regulieren, durch die gemeinsame Sekretion mit Insulin eine glukoseregulierende Wirkung ausüben, die postprandiale Glucagonfreisetzung hemmen und die Magenentleerung verzögern. Es hat offensichtliche Vorteile bei der Behandlung von Diabetes, Fettleibigkeit, metabolischem Syndrom, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und anderen Aspekten und verfügt über eine breite Nachfrage und Anwendungsaussichten.
Chemische Strukturformel von Cagrilintid
Grundlegende Informationen
EnglischName：Cagrilintid
Firmennummer：GT-F064
CAS：1415456-99-3
SReihenfolge：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2(Disulfidbrücke:cys4-cys9)
MolekularFormula：C194H312N54O59S2
MolekularGewicht：4409.01
Rohstoffe fürCagrilintid
Synthetischer Weg
Cagrilintid-Zubereitungsdiagramm
(1)Vorbereitung vonCagrilintidPeptidharz
Nehmen Sie 1,5 mmol der ersten geschützten Aminosäure und 1,5 mmol HOBT, lösen Sie es mit einer geeigneten Menge DMF auf und kühlen Sie es auf 0–15 °C ab. Nehmen Sie weitere 1,5 mmol DIC, geben Sie es langsam unter Rühren zur DMF-Lösung der geschützten Aminosäure und rühren Sie die Reaktion 10 Minuten lang bei 0–15 °C, um eine aktivierte geschützte Aminosäurelösung zu erhalten, die beiseite gestellt wird.
Nehmen Sie 0,5 mmol Aminoharz (Substitutionsgrad 0,42 mmol/g), quellen Sie es 60 Minuten lang mit DMF-Lösung auf, entschützen Sie es 30 Minuten lang mit 20 %iger Pip/DMF-Lösung, waschen Sie und filtrieren Sie, um das umzusetzende Harz zu erhalten.
Fügen Sie die aktivierte erste geschützte Aminosäurelösung dem umzusetzenden Harz hinzu, führen Sie die Kupplungsreaktion bei 25–35 °C für 120–300 Minuten durch, filtrieren und waschen Sie, um das Harz zu erhalten, das 1 geschützte Aminosäure enthält: Fmoc-Pro-Resin
Greifen Sie mit der gleichen Methode wie oben nacheinander auf die entsprechende 2. bis 38. geschützte Aminosäure oder die oben genannten Fragmente zu:Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，Mono-tert-butyleicosandioat, was 4,98 g Carmegliptin-Peptidharz ergibt
(2)Zubereitung von RohölCagrilintid lineares Peptid
Nehmen Sie 4,49 g Carfilzomib-Peptidharz, fügen Sie eine gemischte TFA-Lösung hinzu. Das Verhältnis der gemischten Lösung beträgt TFA:EDT/Tis/Phenol/H₂O = 87,5:2,5:5:2,5:2,5 und die Dosierung beträgt 8 ml pro Gramm Harz. Rühren Sie die Reaktion 3 Stunden lang bei 20–30 °C, filtrieren Sie die Reaktionsmischung mit einem Sandkerntrichter, sammeln Sie das Filtrat, waschen Sie das Harz dreimal mit einer kleinen Menge TFA, kombinieren Sie die Filtrate, geben Sie MTBE zur Fällung hinzu, waschen Sie den Niederschlag dreimal mit MTBE und pumpen Sie trocken, um ein cremefarbenes Pulver zu erhalten, das 2,08 g rohes lineares Carfilzomib-Peptid enthält.
(3)Herstellung einer Rohlösung des zyklischen Cagrilintid-Peptids
Nehmen Sie 0,50 g rohes linearesCAgrilintid-Peptid herstellen, eine rohe lineare Peptidlösung mit einer Konzentration von 5,0 mg/ml herstellen, 5 ml DMSO-Lösung tropfenweise unter Rühren hinzufügen und 20 Stunden lang bei 20–30 °C reagieren lassen, um eine rohe zyklische Cagrilintid-Peptidlösung zu erhalten.
(4)Zubereitung von raffiniertemCAgrilintid-Peptid
Nimm das RohölCArraglitid-Lösung mit zyklischem Peptid und filtern Sie sie mit einer 0,45 μm gemischten mikroporösen Filtermembran；
Reinigen und bereiten Sie es mithilfe der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie vor und sammeln Sie esCArragliptin-Fraktionen；
Für den Pufferaustausch wurde Hochleistungsflüssigkeitschromatographie verwendet. Der Hauptpeak nach dem Pufferaustausch wurde gesammelt und seine Reinheit durch analytische Flüssigkeitschromatographie nachgewiesen. Die Hauptpeaklösungen nach dem Pufferaustausch wurden kombiniert und unter reduziertem Druck konzentriert, um eine wässrige Essigsäurelösung von Carbotid zu erhalten, die gefriergetrocknet wurde, um 152,18 mg raffiniertes Carbotid mit einer Reinheit von 99,58 %, einer maximalen Einzelverunreinigung von 0,09 %, einer Gesamtausbeute von 31,87 % und einem Molekulargewicht von 4409,0 zu erhalten
HPLC Diagramm
MS-Diagramm
Die obigen Beispiele zeigen, dass das durch das erfindungsgemäße Verfahren erhaltene Produkt im Vergleich zum schrittweisen Kopplungssyntheseverfahren eine Reinheit von mehr als 99,0 % aufweist und jede einzelne Verunreinigung weniger als 0,1 % beträgt, was die Produktqualität und Gesamtausbeute verbessert. Das Verfahren ist einfach und leicht zu steuern, weist einen hohen Industrialisierungsgrad auf und bietet umfangreiche praktische Wert- und Anwendungsaussichten.
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