Überblick
Icatibantacetat ist eine krankheitsspezifische Behandlung des hämangioiden Angioms (HAE), die von Shire entwickelt wurde und am 25. August 2011 die FDA-Zulassung für die Behandlung akuter Episoden hereditärer Angioödeme bei Erwachsenen ab 18 Jahren erhielt. Es ist außerdem das dritte von der FDA zugelassene Medikament zur Behandlung von HAE-Attacken. Icatibantacetat besitzt eine ähnliche Struktur wie ein Bradykinin-ähnliches D-Decapeptid, enthält jedoch fünf nicht aus Proteinen stammende Aminosäuren. Es wirkt als starker, selektiver kompetitiver Antagonist der Bradykinin-Typ-2-Rezeptoren (B2) und lindert lokale Schwellungen, Entzündungen und Schmerzen im Zusammenhang mit HAE-Episoden, indem es die Wirkung von Bradykinin hemmt. HAE stellt nur eine von mehreren möglichen Indikationen dar, für die Icatibant indiziert sein kann; Weitere potenzielle Anwendungen sind Asthma, Leberzirrhose und andere Arten von Angioödemen. Folglich weist Icatibantacetat einen erheblichen therapeutischen Wert und breite Marktaussichten auf.
Chemische Strukturformel vonIcatibantacetat
EunentbehrlichIInformationen
Chinesischer Name:醋酸艾替班特
Englischer Name: Icatibantacetat
Firmen-ID：GT-F005
CAS：138614-30-9；130308-48-4
SSeriennummer：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH
Molekulare Formel：C59H89N19O13S
MMolekulargewicht：1304.52
Icatibantacetat MS-Spektrum
Synthetischer Weg
1: Herstellung von Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-Harz
Geben Sie 11,1 g 2-Chlortrifenylmethylchlorid-Harz mit einer Substitutionsrate von 0,9 mmol/g in die Festphasen-Reaktionssäule und geben Sie anschließend 30 Minuten lang mit DMF gequollenes Harz hinzu. 3,50 hinzufügenμL DIPEA zu 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH geben und 5 Minuten lang aktivieren; Geben Sie dann das mit DMF gequollene Harz hinzu und lassen Sie die Mischung nach 10 Minuten ein Gleichgewicht erreichen. Fügen Sie weitere 3,50 hinzuμL DIPEA, 45 Minuten bei Raumtemperatur reagieren lassen und schließlich 20 Minuten mit Methanol verschließen. Verdampfen Sie das Reaktionsgemisch, waschen Sie es dreimal mit DMF, dreimal mit DCM und kontrahieren Sie es dann dreimal mit Methanol für 3 Minuten, 5 Minuten bzw. 8 Minuten, wodurch Sie Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-Harz mit einer gemessenen Substitutionsrate von 0,5 mmol/g erhalten.
2：Kupplung von Fmoc-Oic-OH
10 mmol Fmoc-Arg (Pbf)-CTC-Harz abwiegen und in einen Festphasenreaktor geben, 0,5 h in DMF quellen lassen, dann den Fmoc-Schutz zweimal mit 20 %iger DBLK-Lösung für 10 min bzw. 5 min entfernen; Konjugieren Sie es nach dem Waschen mit Fmoc-Oic-OH. Lösen Sie 11,73 g Fmoc-Oic-OH, 4,9 g HOBt und 6,1 ml DIC in DCM (zur Solubilisierung kann eine kleine Menge DMF hinzugefügt werden), aktivieren Sie die Mischung 7 Minuten lang in einem Eiswasserbad, übertragen Sie sie dann in den Festphasenreaktor und reagieren Sie 1 Minute lang bei Raumtemperatur–2 Std. Der Reaktionsendpunkt wird mit der Indantron-Methode bestimmt. Nach Abschluss das Reaktionsgemisch absaugen, mit DMF waschen, den Fmoc-Schutz zweimal mit 20 %iger DBLK-Lösung für 10 bzw. 5 Minuten entfernen, erneut waschen und für die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vorbereiten.
3：Kupplung von Fmoc-D-Zit-OH
Lösen Sie 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g HOAt und 11,4 g HATU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). 3,87 g DIPEA unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Übertragen Sie die Mischung dann in einen Festphasenreaktor und reagieren Sie 1 Jahr lang bei Raumtemperatur–2 Stunden. Der Abschluss der Reaktion wird durch die Indiol-Methode bestimmt. Nach der Reaktion das Reaktionsgemisch entfernen, mit DMF waschen und den Fmoc-Schutz mit 20 %iger DBLK-Lösung entfernen. Bereiten Sie nach dem Waschen die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vor.
4：Kupplung von Fmoc-Ser(tBu)-OH
Lösen Sie 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g HOAt und 6,1 ml DIC in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). Nach der Aktivierung unter einem Eiswasserbad für 7 Minuten wird die Mischung in einen Festphasenreaktor überführt und 1 bei Raumtemperatur umgesetzt–2 Stunden; Der Abschluss der Reaktion wird durch die Indiol-Methode bestimmt. Entfernen Sie nach Abschluss das Reaktionsgemisch, waschen Sie es mit DMF, entfernen Sie dann den Fmoc-Schutz mit einer 20 %igen DBLK-Lösung und waschen Sie es anschließend, bevor Sie mit der Kopplung mit der nächsten Aminosäure fortfahren.
5：Kupplung von Fmoc-Dies-OH
Lösen Sie 11,79 g Fmoc-Thi-OH, 5,00 g HOBt und 11,37 g HBTU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). 3,87 g DIPEA unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Anschließend wird die Mischung in einen Festphasenreaktor überführt und 1 Jahr lang bei Raumtemperatur reagieren gelassen–2 Stunden. Der Abschluss der Reaktion wird durch die Indiol-Methode bestimmt. Nach der Reaktion das Reaktionsgemisch entfernen, mit DMF waschen und den Fmoc-Schutz mit 20 %iger DBLK-Lösung entfernen. Bereiten Sie nach dem Waschen die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vor.
6：Kupplung von Fmoc-Gly-OH
Lösen Sie 8,91 g Fmoc-Gly-OH, 5,00 g HOBt und 9,63 g TBTU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). 3,63 g TMP unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Anschließend wird die Mischung in einen Festphasenreaktor überführt und 1 Jahr lang bei Raumtemperatur reagieren gelassen–2 Stunden. Der Abschluss der Reaktion wird durch die Indanon-Methode bestimmt. Nach der Reaktion das Reaktionsgemisch entfernen, mit DMF waschen und den Fmoc-Schutz mit 20 %iger DBLK-Lösung entfernen. Bereiten Sie nach dem Waschen die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vor.
7：Kupplung von Fmoc-Hyp(tBu)-OH
12,27 g Fmoc-Hyp(tBu) auflösen–OH, 5,00 g HOAt und 9,66 g TATU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung hinzugefügt). 3,63 g TMP unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Übertragen Sie die Mischung dann in einen Festphasenreaktor und reagieren Sie 1 Jahr lang bei Raumtemperatur–2 Stunden. Der Reaktionsendpunkt wird mit der Indiol-Methode bestimmt. Entfernen Sie nach Abschluss die Reaktionsmischung, waschen Sie sie mit DMF und entfernen Sie den Fmoc-Schutz mit 20 %iger DBLK-Lösung. Bereiten Sie nach dem Waschen die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vor.
8：Kupplung von Fmoc-Profi-OH
Lösen Sie 10,11 g Fmoc-Pro-OH, 5,00 g HOAt und 11,4 g HATU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). 3,87 g DIPEA unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Übertragen Sie die Mischung dann in einen Festphasenreaktor und reagieren Sie 1 Jahr lang bei Raumtemperatur–2 Stunden. Der Reaktionsendpunkt wird mit der Indiol-Methode bestimmt. Entfernen Sie nach Abschluss die Reaktionsmischung, waschen Sie sie mit DMF und entfernen Sie den Fmoc-Schutz mit 20 % DBLK. Bereiten Sie nach dem Waschen die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vor.
9：Kupplung von Fmoc-Arg(Pbf)-OH
Lösen Sie 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt und 11,4 g HATU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). 3,87 g DIPEA unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Übertragen Sie die Mischung dann in einen Festphasenreaktor und reagieren Sie 1 Jahr lang bei Raumtemperatur–2 Stunden. Der Abschluss der Reaktion wird durch die Indiol-Methode bestimmt. Nach der Reaktion das Reaktionsgemisch entfernen, mit DMF waschen und den Fmoc-Schutz mit 20 %iger DBLK-Lösung entfernen. Bereiten Sie nach dem Waschen die Kopplung mit der nächsten Aminosäure vor.
10：Kupplung von Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH
Lösen Sie 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt und 11,4 g HATU in DCM (mit einer kleinen Menge DMF zur Solubilisierung). 3,87 g DIPEA unter ein Eiswasserbad geben und 7 Minuten lang aktivieren; Übertragen Sie die Mischung dann in einen Festphasenreaktor und reagieren Sie 1 Jahr lang bei Raumtemperatur–2 Stunden. Der Reaktionsendpunkt wird mit der Indiolon-Methode bestimmt. Entfernen Sie nach Abschluss die Reaktionsmischung, waschen Sie sie mit DMF und verwenden Sie dann 20 % DBLK, um den Fmoc-Schutz zu entfernen. Dreimal mit DMF, dreimal mit DCM und dreimal mit Methanol zur Kontraktion waschen (für 3 min, 5 min bzw. 8 min), gefolgt von Vakuumtrocknung, um Etibant-Peptidacetatharz zu erhalten.
HPLC-Chromatogramm von Icatibantacetat
11：Harzpyrolyse von Icatibantacetat
Bereiten Sie 200 ml Lysereagenz mit 190 ml Trifluoressigsäure, 6 ml Triisopropylsilan und 4 ml Wasser vor und kühlen Sie es 30 Minuten lang im Kühlschrank vor. Geben Sie 20,0 g Etibant-Peptidacetatharz in einen 500-ml-Rundkolben und geben Sie dann die vorbereiteten 200-ml-Lysereagenz zum Harz hinzu, während Sie unter einem Eisbad und unter Stickstoffstrom rühren. Nach 30-minütiger Reaktion das Eisbad entfernen und die Reaktion 2 Stunden bei Raumtemperatur fortsetzen. Filtern Sie das Harz und sammeln Sie das Filtrat. Waschen Sie das Harz mit einer kleinen Menge Trifluoressigsäure, filtrieren Sie und kombinieren Sie die Filtrate. Das Filtrat nach und nach zu 20 l eiskaltem Ether hinzufügen; es bildet sich ein weißer Niederschlag. Zentrifugieren Sie bei 3000 U/min, um den Niederschlag zu sammeln, waschen Sie fünfmal mit eiskaltem Ether und trocknen Sie unter reduziertem Druck, um 10,3 g Rohpeptid mit einer HPLC-Reinheit von >90 % zu erhalten.
